小鼠生化位點檢測

乙酸纖維薄膜電泳是生物化學的方法，該技術(shù)運用于實驗動物遺傳質(zhì)量控制只有二十余年的歷史。由于該方法能檢查近20對等位基因，涉及十幾條染色體，利于反映被檢品系的遺傳概貌，所以，目前認為此法靈敏度高，準確性強，檢出速度快，用樣量小，是遺傳檢測諸方法中較為理想的一種。

一、實驗器材

1．樣品

(1)血清：用于Es-1和Trf兩位點檢查。

(2)溶血清：用于檢查Hbb、Car-2和Ldr-1位點。

(3)腎勻漿：用于檢查Es-2、Es-3、Idh-1、Mod-1、Akp-1、Pgm-1、Pep-1、Gpd-1、Gpi-1、Ce-2位點。

(4)尿液：一般在早上8～9時取鼠原尿，做一倍稀釋后方可使用，用于Mup-1位點的檢查。

2．緩沖液：略。

3．染色液：略。

4．點樣品一套，電泳儀一臺，電泳槽一個，乙酸纖維薄膜若干張。

5．滴管、管架、直徑10cm培養(yǎng)皿、普通濾紙、燒杯各二個。

二、實驗方法和步驟

1．實驗方法

我們采用的是水平乙酸纖維薄膜電泳法即用普通濾紙做鹽橋，在低溫常壓下的電泳。

2．實驗步驟

(1)把電泳緩沖液加入電泳槽內(nèi)到紅線位置，鹽橋濾紙對折后用訂書機將其同定在橋架上，然后加蓋置于4℃冰箱或相應(yīng)冷室里預(yù)冷。

(2)從低溫(-20℃)冰箱中取出樣品，于室溫下自然解凍，并同時將乙酸纖維薄膜裁成適當大小投入緩沖液中浸泡濕透。

(3)從緩沖液中取出乙酸纖維薄膜夾于兩張普通濾紙間，用手輕壓濾紙，以吸去薄膜上的多余緩沖液。

(4)樣品解凍后，用彎頭滴管吸取少量樣品液于點樣板上的小方格內(nèi)，并依序記下樣品號碼，再用點樣刷蘸取適量樣品液點在乙酸纖維薄膜粗糙面距邊緣1.5cm處，之后迅速轉(zhuǎn)入電泳槽內(nèi)，按規(guī)定方向(緩沖液pH值大于5.6的，樣品的電泳方向是由負極向正極泳動，若pH值小于或等于5.6則由正極向負極泳動)把點上樣的薄膜水平搭在鹽橋上，待調(diào)整好位置后加蓋飽和1～2min，接通電泳，選擇適當電壓和電流并按規(guī)定時間電泳。

(5)時間到后立即將電壓電流選擇調(diào)零和關(guān)掉電源，依次取出走完的乙酸纖維薄膜，放入相應(yīng)的染色液中，染色5min后取出于5％乙酸溶液脫色1～2h，或直到電泳帶背影清楚為止，自然風干后，照相或透明等處理，易于長期保存。

三、結(jié)果分析

結(jié)果分析指的是電泳帶型的確定。我們知道，每個品系都有自己固定的電泳帶型，這個原始的固定電泳帶型稱作該品系的標準型。品系間各位點的標準型有的相同，有的則不同；而品系間生化位點的標志相異對于電泳帶型的確定是很有用的。在實際工作中，由于DBA／2和C57BL兩品系小鼠的多數(shù)生化位點標志都不相同，故在生化位點檢查時將其用作確定待知鼠電泳帶型的參照物來使用。

一般在電泳時，總是把待測樣品和已知標準型樣品在同樣條件和同一支持物上走電泳的，這樣待測作品就可與標準型樣品的帶型進行對比了，以此即可確定待測樣品的帶型。例如我們把特測樣品和已知標準的DBA／2和C57BL品系的樣品同時走Car-2電泳，其待測帶型如果跟DBA／2一樣則為b型，若和C57BL的一樣就是a型，要是即同DBA／2，又同C57BL，那么它就是混雜帶型。

注意：對于一個單位來講，*次檢查應(yīng)該是的，特別是新引進的或新培育的品系更應(yīng)如此。但如果這個單位已進行過一次檢測后，隔一段時間。要對已查過的品系進行再復(fù)查時，若做生化位點檢測，可只測臨界位點，即Car-2、MuP-1、Hbb、Es-1、Trf和Es-3。這樣可節(jié)省人力和物力。