肌炎動(dòng)物模型

多發(fā)性肌炎(polymyositis)是神經(jīng)肌肉疾病中常見(jiàn)的一種自身免疫病。細(xì)胞免疫和體液免疫異常對(duì)肌組織的損害起關(guān)鍵作用。

1 大鼠肌炎模型

(1)復(fù)制方法  取豚鼠骨骼肌，用刀式勻漿機(jī)勻漿，制備肌漿球蛋白，在成年Lewis大鼠的雙側(cè)腳掌、背部?jī)蓚?cè)、尾根部5點(diǎn)，皮下注射弗氏佐劑(CFA)加等量肌球蛋白懸液；免疫劑量按每點(diǎn)1ml/kg體重，每周免疫1次，連續(xù)4周。同時(shí)經(jīng)腹腔注射百日咳桿菌原液，每只0.5ml，細(xì)菌數(shù)為4.0×10的10次方個(gè)。

(2)模型特點(diǎn)  大多數(shù)模型大鼠均表現(xiàn)出活動(dòng)遲緩、行走搖擺、倦怠無(wú)力、呼吸急促或微弱、背部向上隆起、頭部下垂、進(jìn)食減少、生長(zhǎng)緩慢等癥狀；免疫4周后，光鏡下可見(jiàn)肌纖維呈不同程度的變性，胞質(zhì)混濁腫脹，肌纖維橫紋模糊或消失，肌組織間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)散在及灶性的淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肌纖維萎縮。組織切片酶組織化學(xué)染色顯示肌細(xì)胞線粒體代謝異常，ATP酶顯示Ⅰ、Ⅱ型肌纖維均受累。大鼠血清中肌球蛋白(myosin)特異性抗體含量明顯增高。刀豆蛋白A誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖明顯。

(3)比較醫(yī)學(xué)  過(guò)去的研究報(bào)道不同學(xué)者曾分別用家兔、豚鼠、人和雞的骨骼肌勻漿免疫大鼠，通過(guò)結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)豚鼠和人的骨骼肌勻漿免疫過(guò)的動(dòng)物肌炎癥狀更為嚴(yán)重。本模型制作方法通過(guò)采用豚鼠骨骼肌肌球蛋白加弗氏佐劑多次免疫大鼠(Lewis大鼠，系近交系品種，對(duì)自身免疫反應(yīng)較為敏感)，使其體內(nèi)發(fā)生特異性免疫反應(yīng)從而產(chǎn)生肌肉抗體，同時(shí)豚鼠骨骼肌與大鼠骨骼肌又具有抗原交叉性，制成實(shí)驗(yàn)性肌炎的模型。

從動(dòng)物的臨床表現(xiàn)及病理活檢情況看，與人類多發(fā)性肌炎相近，實(shí)驗(yàn)表明，同時(shí)腹腔注射百日咳桿菌原液的大鼠炎癥反應(yīng)比單純皮下免疫注射肌球蛋白和弗氏佐劑的乳化物更加嚴(yán)重，這與以前的有些研究報(bào)道應(yīng)用百日咳毒素腹腔注射的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，但具體作用機(jī)制不明。在多發(fā)性肌炎的發(fā)病機(jī)制中，細(xì)胞免疫和體液免疫異常對(duì)肌肉均有不同程度的影響，但細(xì)胞免疫在其中占優(yōu)勢(shì)。本方法制作的肌炎模型，在模型動(dòng)物的肌組織中有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肌纖維變性及壞死等，說(shuō)明模型制作過(guò)程中有細(xì)胞免疫反應(yīng)參與，而這一結(jié)果的產(chǎn)生，是由于肌球蛋白的免疫誘導(dǎo)所形成的。刀豆蛋白A是T淋巴細(xì)胞刺激原，通過(guò)非特異性活化多克隆T細(xì)胞來(lái)增強(qiáng)機(jī)體整體的T細(xì)胞免疫。因此，刀豆蛋白A誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖代表了機(jī)體整體T細(xì)胞的免疫功能。

2 豚鼠肌炎模型

(1)復(fù)制方法  先用家兔新鮮純骨骼肌制備肌勻漿：切碎肌肉后加pH 7.2ψ(H3PO4)=20％的緩沖液，冰水浴中用刀式勻漿機(jī)以1700r/min勻漿3次，一次5s，間隔30s。然后用4層紗布過(guò)濾，過(guò)濾液再用磨式勻漿機(jī)以3000r/min勻漿3次，一次5S，間隔30s。加去垢劑Triton-X-10，兩者比例100：1，混合后25009×10min(4℃)離心，上清液即肌勻漿分裝置-20℃冰箱備用。實(shí)驗(yàn)前肌勻漿與弗氏佐劑2：1混合，每周于豚鼠項(xiàng)背部皮下注射一次(0.2ml肌勻漿加0.1ml佛氏佐劑)，共8周。

(2)模型特點(diǎn)  注射后1～2d，注射局部有0.5～1cm的硬節(jié)，紅腫，1周后結(jié)節(jié)變軟、有波動(dòng)感、破潰，部分體溫升高，2周時(shí)明顯，4周開(kāi)始創(chuàng)口愈合，腫塊逐漸變小，致8周時(shí)呈硬塊。4～6周后出現(xiàn)不同程度的活動(dòng)減少，體重減輕，毛色暗淡無(wú)光。注射后4周開(kāi)始血肌酶(CK、LDH、AST)上升，6～8周達(dá)高峰；肌電圖顯示運(yùn)動(dòng)單位時(shí)限明顯縮短、波幅降低、多相波增多；免疫4、6、8周時(shí)組織學(xué)檢查均見(jiàn)以骨骼肌多發(fā)性炎癥為特點(diǎn)的病理改變：鏡下見(jiàn)橫紋肌呈灶性分布的肌細(xì)胞變性、壞死和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)小血管壁增厚，周?chē)醒准?xì)胞浸潤(rùn)。電鏡下見(jiàn)肌原纖維明暗帶消失，肌原纖維腫脹、斷裂、出現(xiàn)空泡化，線粒體凝聚、空泡化、肌束間隙增寬，提示有肌萎縮。

(3)比較醫(yī)學(xué)  人類發(fā)生多發(fā)性肌炎時(shí)其機(jī)體血清肌酶水平升高，肌電圖呈肌原性損害，鏡下病理組織學(xué)特征主要為肌纖維變性、壞死及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。兔骨骼肌與豚鼠骨骼肌具有抗原交叉性，以家兔骨骼肌勻漿與弗氏佐劑多次免疫豚鼠制成的實(shí)驗(yàn)性肌炎模型，在肌酶、肌電圖和病理組織學(xué)方面的改變與人類肌炎有相似之處。