技術(shù)文章
Technical articles(1)復(fù)制方法 雄性小鼠,體重為25~30g。
1)SAH的復(fù)制 經(jīng)腹腔注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉(60mg/kg體重)麻醉,手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。切開(kāi)分離右側(cè)股動(dòng)脈并插管,以備抽取60μl自體血進(jìn)行顱內(nèi)注射用(在顱內(nèi)注射60μl的量時(shí)外漏少,且鼠死亡率低)。小鼠頭部前傾30°,頭頂后部正中切口,暴露頭骨。選用30號(hào)穿刺針從腦后下部中線(xiàn)向左向下45°穿刺進(jìn)入枕大池。由股動(dòng)脈抽取60μl自體血(隨后腹腔注射60μl生理鹽水以補(bǔ)充正常體液量)緩慢注入枕大池,持續(xù)時(shí)間約1min。當(dāng)注入20μl時(shí),動(dòng)物呼吸出現(xiàn)異常,注入到60μl時(shí),可能發(fā)生呼吸暫停。注射結(jié)束后立即使動(dòng)物頭前傾75°,持續(xù)10min,以使血液在枕大池內(nèi)擴(kuò)散開(kāi)來(lái)。緩慢抽出穿刺針,創(chuàng)面點(diǎn)滴2~3滴(按2.50×10000U/ kg體重的劑量)慶大霉素,結(jié)扎股動(dòng)脈并抽出插管,仔細(xì)縫合切口以防腦脊液和血液外漏。手術(shù)期間保持動(dòng)物體溫在37℃。動(dòng)物于術(shù)后1h清醒并逐漸恢復(fù)正常攝食,正常術(shù)后死亡率<5%。
2)腦血管造影檢查 可分別于SAH后1, 6, 12h和1, 1.5, 2, 3, 4, 5和7d進(jìn)行腦血管造影:經(jīng)左心室插管,以5.5ml/min的速度灌注10%甲醛溶液2min,采用立體顯微攝像測(cè)量大腦前動(dòng)脈、大腦中動(dòng)脈和基底動(dòng)脈。
3)組織學(xué)檢查 動(dòng)物先以0.1mol/L的磷酸緩沖液灌洗,隨后以4%多聚甲醛和含有2.5%的谷氨酸鹽混合的0.1mol/L的磷酸緩沖液灌洗,速度為5.5ml/min。迅速摘除鼠腦并繼續(xù)固定在上述液體中(4℃)24h,分離大腦前動(dòng)脈、大腦中動(dòng)脈和基底動(dòng)脈,做0.5μm厚度的切片,甲苯胺藍(lán)染色。
(2)模型特點(diǎn) 在SAH后2d內(nèi)大腦前動(dòng)脈和基底動(dòng)脈上方、大腦中動(dòng)脈附近均有血凝塊,大腦前動(dòng)脈周?chē)龎K多且清除緩慢,腦頂部血凝塊在SAH 3~4d后基本消失。大腦前動(dòng)脈在SAH后1h開(kāi)始收縮,其直徑可減少30%~40%,并持續(xù)1~3d,至第7日時(shí),血管直徑逐漸恢復(fù)正常。大腦中動(dòng)脈和基底動(dòng)脈在SAH后6h收縮達(dá)20%~25%,并持續(xù)1~1.5d。病理組織學(xué)檢查可見(jiàn),在SAH 1d后,血管壁的內(nèi)彈性層明顯皺縮、管腔狹窄、管壁增厚。血管的平滑肌細(xì)胞無(wú)明顯異常。準(zhǔn)確的操作可避免腦干、脊髓和小腦的損傷。
(3)比較醫(yī)學(xué) 截至目前,還沒(méi)有一個(gè)可以模仿人類(lèi)DCV的動(dòng)物模型。根據(jù)Schwartz的描述,良好的DCV模型應(yīng)具有:①持續(xù)性的蛛網(wǎng)膜下腔出血。②出血量可控。③出血機(jī)制酷似血管瘤的破裂。④血液的分布與蛛網(wǎng)膜下腔出血一致。⑤容易操作且價(jià)格合理。理想的實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)該是直接刺破血管壁,使血液流出。然而此種方法動(dòng)物死亡率很高。此模型采用直接枕大池注血模擬了血管瘤破裂的方式,血液分布與SAH相似,并引起持續(xù)的血管痙攣,病理變化與人類(lèi)DCV相似。而且具有重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、成本低、死亡率低的特點(diǎn)。